Често задавани въпроси за центробежни филтърни устройства
Q1. Необходимо е да се разделят протеини с различни молекулни тегла, така че от каква разлика трябва да се нуждаят молекулните тегла на протеините?
О: Размерът на двата протеина трябва да се различава 10 пъти или повече.
Q2. Може да се центрофугираалфилтърните устройства да са стерилизирани и устойчиви на измиване с алкали?
О: Може да се стерилизира със 75 процента воден разтвор на етанол и мембраната може да издържи 0.1-0.5N алкално измиване с натриев хидроксид.
Q3. Как да се справим, ако протеинът се утаи по време на концентрацията?
О: Ако протеинът се концентрира твърде бързо или твърде концентрирано, това може да причини утаяване на протеин и крайната концентрация на протеина след концентрацията не трябва да бъде твърде висока; Протеини, които са чувствителни към степента на концентрация и са склонни да се утаяват, предложен метод за подобрения:
Намалете центробежната скорост
Използвайте ултрафилтрационна мембрана с по-висока граница на молекулното тегло
Издухайте и изсмучете концентрираната епруветка и след това центрофугирайте
Q4. Каква е възможната причина, поради коятоцентробежни филтърни устройстване може да се центрофугира надолу?
О: Можете да използвате около 20 процента воден разтвор на етанол за първоначално центрофугиране, ако ултрафилтрационната тръба не може да бъде центрофугирана, тъй като ултрафилтрационната мембрана е напълно суха, повърхността на мембраната е слабо хидрофобна и потокът може да бъде възстановен след инфилтрация с ниска разтворител за повърхностно напрежение.
Q5. Методи за правилно използване и съхранение на центробежни филтърни устройства
A: Центробежните филтърни устройства трябва да бъдат центрофугирани с пречистена вода преди употреба, за да се провери тяхната цялост. След всяка употреба е необходимо да се съхранява във влажно състояние, за да се предотврати изсъхване на мембраната.
Q6. Как центробежните филтърни устройства премахват ендотоксина?
О: Предоставените от нас центробежни филтърни устройства не са третирани с ендотоксини и тъй като ендотоксините съществуват широко в природата, пробите, които изискват ендотоксини, могат да бъдат предварително почистени с 0.5N натриев хидроксид преди експеримента и след това измити с RO вода за отстраняване на по-голямата част от ендотоксина.
Q7. Когато концентрираният протеин се използва за анализ надолу по веригата, се установи, че има смущения, каква е причината?
A: Центробежните филтърни устройства могат да бъдат предварително измити с буферен разтвор или пречистена вода. Ако смущението все още съществува, измийте с 0.1N натриев хидроксид и след това измийте с пречистена вода.
Q8. Iустановено е, че няма целеви протеин в концентрата след концентриране. Какви са възможните причини?
О: 1) Първоначалната концентрация на протеина не трябва да е твърде ниска, ако концентрацията е твърде ниска, мембраната може да не успее да задържи.
2) Изберете подходящия размер на порите на мембраната. Центробежната концентрация на филтърната тръба принадлежи към филтриране в задънена улица и размерът на порите на мембраната обикновено е по-малък от 2 пъти или повече от целевия протеин.
3) Изберете правилната центробежна скорост
4) Дали целевият протеин се утаява
Q9. Пасивираща обработка на центробежни филтърни устройства
A: Пасивиращата предварителна обработка на повърхността на центробежните филтърни устройства може да намали загубата на адсорбция на протеин върху повърхността на мембраната, в повечето случаи предварителната обработка на колоната преди концентриране на разредения протеинов разтвор може да подобри възстановяването, тъй като разтворът може да запълни откритата празни места за адсорбция на протеини върху мембраната и повърхността, методът на пасивиране е предварително накисване на колоната с голям обем пасивиращ разтвор за повече от 1 час, промиване на колоната обилно с дестилирана вода и след това центрофугиране на колоната веднъж с дестилирана вода за да премахнете напълно разтвора за пасивиране, който може да остане върху мембраната, внимавайте да не оставите мембраната да изсъхне след пасивиране, ако искате да я запазите за бъдеща употреба, трябва да добавите стерилна дестилирана вода, за да поддържате мембраната мокра., моля, свържете се с нашите инженери за общи решения за пасивиране.
Q10. Ултрафилтрационната мембрана филтрира ли молекулите йерархично?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 процента, ако се използва 100 kd ултрафилтрационна мембрана, обаче, молекулите, по-малки от размера на порите на мембраната, не преминават напълно свободно през мембраната. Степента на молекулярно задържане от 67 kd е повече от 70 процента, а протеинът от 43 kd също е повече от 40 процента отрязан, различните компоненти в смесен разтвор преминават през мембраната не толкова просто и лесно, колкото еднокомпонентен разтвор, на практика , ако искате да изолирате две макромолекули, разликата в молекулното тегло между тях трябва да бъде осем пъти или повече.
Q11. Как ефективно да се разделят големи и малки молекули чрез ултрафилтрация?
О: Поради нуждите на процеса, примесите в макромолекулите се отстраняват или малките молекули се отстраняват от макромолекулите, това е нормално при производството. Много е необходимо да изберете подходящия размер на порите на мембраната, метод на филтриране и работни условия. Най-общо казано, ако спецификацията на MWCO на мембраната е избрана между двата протеина, може да се постигне относително идеално разделяне. Ако протеиновият разтвор е относително разреден, работата под ниско налягане също ще помогне за постигане на по-добри резултати. Изберете филтриране на тангенциален поток и извършете многократна диафилтрация, за да получите по-добър ефект на разделяне.
