DEAE слаба анионобменна мембранна хроматография

DEAE слаба анионобменна мембранна хроматография – Представяне на продукта

 

1. Преглед

DEAE слаба анионообменна хроматография е техника за пречистване, базирана на разликите в свойствата на заряда и плътността на заряда на различни биомолекули. Тъй като повечето биомакромолекули съдържат функционални групи като карбоксилни или хидроксилни групи, техните зарядни характеристики и големина могат да бъдат регулирани чрез модифициране на рН на буферния разтвор. След като биомолекулите се свържат с противоположно заредена анионна или катионна обменна среда, разделянето се постига чрез промяна на йонната сила или pH на подвижната фаза. Молекулите с по-слаб афинитет на свързване се елуират първи, последвани от тези с по-силен афинитет на свързване, като по този начин се постига ефективно разделяне

 

2. Предимства на продукта

2.1 Висока ефективност: Постига силно свързване при скорости на потока до 40 пъти по-високи от хроматографията на базата на смола-. В сравнение с традиционната-слойна хроматография, мембранната хроматография скъсява общото време на процеса приблизително 30–40 пъти.

2.2 Висока ефективност на свързване: Мембранната хроматография показва висок капацитет на свързване и висока скорост на потока при нисък спад на налягането, което позволява заредените биомолекули да бъдат уловени с едно преминаване през колоната.

2.3 Мащабируеми и гъвкави: Пълната серия от мембранни хроматографски продукти може да отговори на различни нужди от пречистване на биомакромолекули, покривайки всички етапи от разработването на процеса до широкомащабното-производство. Структурният дизайн-тип капсула поддържа както работа за еднократна-употреба, така и повторна употреба след почистване.

2.4 Подобрена производителност: Компактният дизайн минимизира отпечатъка на съоръжението. Чрез елиминиране на процедурите за опаковане на колона, почистване, валидиране на почистване и съхранение на колона, системата може да работи директно след уравновесяване на буфера без опаковане или съхранение на колона. Разходите за труд могат да бъдат намалени с до 50%.

 

3. Технически параметри

3.1 Структурни материали

	лабораторен мащаб	малък мащаб	пилотен мащаб	производствен мащаб
Обем на мембраната	0,2 мл	5 мл	140мл	5L
Поддържаща структура на мембраната	Полипропилен (PP)
Мембранен корпус	Полипропилен (PP)
О пръстен	Силикон

3.2 Експлоатационни характеристики

	лабораторен мащаб	малък мащаб	пилотен мащаб	Мащаб на производство
Обем на мембраната	0,2 мл	5 мл	400мл	5L
Препоръчителен дебит	1-6 мл/мин	25-150 мл/мин	2-12L/мин	25-150л/мин
Максимална работна температура	35 градуса
Максимално работно налягане	3 бара (25 градуса)
Максимално диференциално налягане	3 бара (25 градуса)
Условия на съхранение	20% 乙醇水溶液 20% воден разтвор на етанол

Фигура 1. Промени в капацитета на натоварване на мембранната хроматография след многократни употреби, наблюдавани с BSA.

Освен това, ние оценихме ефективността на отстраняване на протеини и нуклеинови киселини на клетка гостоприемник, използвайки DEAE мембранна хроматография. Резултатите са следните.

	ДНК				HCP
	Възстановяване на IgG	Съдържание (pg/mg IgG) чрез RT PCR		Фактор на премахване	Съдържание (ng/mg IgG) от Elisa		Фактор на премахване
Бягай	%	Преди DEAE мембрана	След DEAE мембрана	Дневник	Преди DEAE мембрана	След DEAE мембрана	Дневник
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Таблица 1. Скорости на отстраняване на ДНК и протеини на клетка гостоприемник от CHO-експресиран IgG с помощта на DEAE мембранна хроматография.

Серия от експерименти демонстрира, че Q мембранната хроматография може ефективно да отстрани примесите, като същевременно поддържа висока скорост на възстановяване на целевия IgG.

Освен това сравнихме мембранната хроматография Gudiling с вносни марки и данните за капацитета на натоварване са както следва.

Фигура 2. Производителност на зареждане на различни протеини върху нашата мембранна хроматография и конкурентни продукти

Цялостната оценка показва, че товароносимостта ни е сравнима с тази на вносните продукти.

Фигура 3. Ефективност на DEAE мембранен хроматографски модул при тестване на колагенов протеин

Използвайки модула за мембранна хроматография DEAE, резултатите от валидирането показват, че повечето целеви колагенови протеини могат да бъдат уловени и елуирани с помощта на 135 mM NaCl.

Чрез тестване при различни условия на елуиране открихме, че мембранната хроматография и агарозната гел хроматография показват подобно поведение на елуиране, където чистотата на протеина варира значително при различни концентрации на сол. В практическата научноизследователска и развойна дейност и производство е необходимо да се определят количествено оптималните равновесни условия на елуиране, за да се получат целеви протеини с висока -чистота.

 

4. Класически случаи на приложение

Отстраняване на ДНК, вируси, протеини на клетка гостоприемник и ендотоксини

Улавяне на плазмиди, вируси, нуклеинови киселини и протеини, както и пречистване на олигонуклеотиди

 

5. Работен процес

5.1: Подготовка и монтаж на оборудването

5.1.1 Мембранният хроматографски модул трябва да се монтира на хроматографската система AKTA по начин, подобен на колоните със смола, като се гарантира, че посоката на потока съвпада със стрелките и посоката на входа. Свържете с помощта на Luer съединители или скоби.

5.1.2 Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и използвайте буфер за еквилибриране, за да прочистите въздуха. Продължете да промивате, докато не се наблюдават мехурчета на изхода, след което свържете изхода за пермеат към хроматографската система

5.2:Третиране преди употреба

5.2.1: Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и извършете предварителна-обработка с 0,5 M NaOH за повече от 5 MV, за да сте сигурни, че мембраната достига равновесие.

5.2.2: При същата скорост на потока, допълнително -третирайте с еквилибриращ буфер (1 × PBS) за повече от 5 MV, за да сте сигурни, че мембраната достига равновесие.

5.3 Процес на хроматография

5.3.1

Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и предварително -третирайте с еквилибриращ буфер за повече от 5 MV, докато мембраната достигне равновесие.

5.3.2

След като пробата е предварително -филтрирана през 0,22 μm филтър, заредете пробата, докато зареждането приключи или бъде достигнат капацитетът на хроматографско зареждане.

5.3.3

Промийте с еквилибриращ буфер за повече от 10 MV, докато UV абсорбцията намалее до базовото ниво.

5.3.4

Използвайте градиентно елуиране или линейно елуиране според плана на процеса и събирайте проби на фракции според изискванията.

5.4, ​​CIP обработка след -използване – CIP на мембранно хроматографско устройство

5.4.1

Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и извършете третиране с почистване-на{-място (CIP) с 0,5 M NaOH за повече от 10 MV, докато UV абсорбцията падне под базовата линия.

5.4.2

След циркулиращо измиване в продължение на 30 минути, преминете към измиване с вода, докато pH стане между 7–8, след което продължете почистването с 20% етанол, докато проводимостта остане почти постоянна.

5.5, Съхранение на мембранна хроматография:

След използване и завършване на CIP, мембранният модул може да бъде отстранен и съхранен чрез накисване в 20% етанол или съхраняван онлайн при стайна температура в 20% разтвор на етанол. 20% етанолният разтвор трябва да се проверява и периодично да се сменя.

 

6. Информация за поръчка

Капсулен филтър със слаба анионообменна мембрана тип DEAE-

	Лабораторен{0}}мащаб	малък мащаб	Пилотна скала	Мащаб на производство
Модел на продукта	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Обем на мембраната	0,2 мл	5 мл	400мл	5L

Популярни тагове: deae слаба анионообменна мембранна хроматография, Китай, доставчици, производители, фабрика, търговия на едро, насипно състояние, на склад, безплатна проба