SP силна катионнообменна мембранна хроматография

Въведение в продуктите за CM{0}}слаба йонообменна мембранна хроматография

 

1. Преглед

CM слаба катион{0}}обменна хроматография е технология за пречистване, при която карбоксиметиловите групи са свързани към мембраната, за да образуват функционален модул. Разделянето се постига въз основа на разликите в свойствата на заряда и плътността на заряда на различните биомолекули. Тъй като повечето биологични макромолекули съдържат карбоксилни или хидроксилни групи, характеристиките и големината на техния заряд могат да се регулират чрез промяна на рН стойността на буферния разтвор. След като биомолекулите се свържат с мембранния модул, носещ противоположни заряди, елуирането се извършва чрез промяна на йонната сила или pH на подвижната фаза. Молекулите с по-слаб афинитет на свързване се елуират първи, докато тези с по-силен афинитет на свързване се елуират по-късно, като по този начин се постига ефективно разделяне.

 

2. Предимства на продукта

2.1 Бързо и ефикасно: Високият капацитет на свързване може да бъде постигнат при скорости на потока до 40 пъти по-бързи от конвенционалната хроматография на базата на смола-. В сравнение с традиционната-слойна хроматография, мембранната хроматография може да съкрати времето на процеса с 30–40 пъти. Типичният работен дебит е 10 MV/min.

2.2 Висока ефективност на свързване: Мембранната хроматография демонстрира висок капацитет на натоварване и високи скорости на потока при условия на нисък спад на налягането, което позволява улавянето на заредени биомолекули с едно преминаване през модула.

2.3 Мащабируеми и гъвкави: Пълната гама от мембранни хроматографски продукти може да отговори на разнообразни нужди за обработка на биомакромолекули, покривайки етапи от разработване на процес до широко{1}}производство. Дизайнът на капсулата позволява приложение за еднократна-употреба или може да се почиства и използва повторно, ако е необходимо.

2.4 Повишена производителност: Компактният дизайн минимизира отпечатъка на съоръжението. Чрез елиминиране на етапите на опаковане на колона, почистване, валидиране на почистване и съхранение на колона, обработката може да започне след уравновесяване с относително малък обем буфер. Без нужда от опаковане на колони, почистване или съхранение, разходите за труд могат да бъдат намалени с до повече от 50%.

 

3 Технически параметри

3.1 Конструктивни материали

	Лабораторен мащаб	малък мащаб	Пилотна скала	Мащаб на производство
Обем на мембраната	0,2 мл	5 мл	140мл	5L
Поддържаща структура на мембраната	Полипропилен
Мембранен корпус	Полипропилен
О пръстен	Силиконова гума

3.2 Работни характеристики

	Лабораторен мащаб	малък- мащаб	Пилотен- мащаб	Мащаб на производство
Обем на мембраната	0,2 мл	5 мл	400мл	5L
Препоръчителен дебит	1-6 мл/мин	25-150 мл/мин	2-12L/мин	25-150л/мин
Максимална работна температура	35 градуса
Максимално работно налягане	3 бара (25 градуса)
Максимална разлика в налягането	3 бара (25 градуса)
Условия на съхранение	20% воден разтвор на етанол

В сравнение с конвенционалните среди, експлоатационният живот на CM мембранната хроматография е сравним с този на CM агарозен гел 6FF.

Фигура 1. Промени в капацитета на натоварване на CM мембранна хроматография след многократни употреби при тестване на лизозим.

Освен това, ние оценихме ефективността на отстраняване на протеини и нуклеинови киселини на клетката гостоприемник чрез мембранна хроматография. Резултатите са показани по-долу.

Таблица 1. Скорости на отстраняване на ДНК и протеини на клетка гостоприемник в CHO-експресиран IgG материал с помощта на CM мембранна хроматография

Серия от експерименти демонстрира, че CM мембранната хроматография може ефективно да отстрани замърсителите, като същевременно поддържа висока степен на възстановяване на целевия IgG

	ДНК				HCP
	Възстановяване на IgG	Съдържание (pg/mg IgG) чрез RT PCR		Фактор на премахване	Съдържание (ng/mg IgG) от Elisa		Фактор на премахване
Бягай	%	Преди Q мембрана	След Q мембрана	Дневник	Преди Q мембрана	След Q мембрана	Дневник
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Използвайки мембранна хроматография Gudiling CM в сравнение с други марки, данните за капацитета на натоварване са показани по-долу.

Капацитет на натоварване (mg/mL)	Дзинбяо 1	Насочване
Лизозим	18	23
Трипсин	17	20

Таблица 2. Производителност на зареждане на различни протеини в нашия продукт в сравнение с конкурентни продукти

Цялостната оценка показва, че товароносимостта ни е сравнима с тази на вносните продукти.

Фигура 2. Тест за капацитет на натоварване на CM мембранен хроматографски модул, използващ лизозим като стандартен протеин.

Динамичният капацитет на натоварване също беше сравнен с този на вносните продукти. Проверката показа, че лизозимът може да се елуира с помощта на 160 mM NaCl, което позволява ефективно улавяне на повечето целеви протеини.

Чрез оптимизиране на различни условия на елуиране, ние открихме, че мембранната хроматография показва поведение на елуиране, подобно на агарозната гел хроматография, където чистотата на протеина варира значително при различни концентрации на сол. В практическата научноизследователска и развойна дейност и производство е необходимо да се определят количествено равновесните условия на елуиране, за да се получи целеви протеин с висока-чистота.

 

4. Типични случаи на приложение

• Отстраняване на ДНК, вируси и протеини на клетка гостоприемник
• Улавяне на плазмиди, вируси и протеини, както и пречистване на олигонуклеотиди
• Обезцветяване на бульона за ферментация на дрожди и улавяне на протеин с висок{0}}капацитет

 

5. Оперативна процедура / Работен процес

5.1: Подготовка и монтаж на оборудването:

5.1.1: Инсталиране на модула за мембранна хроматография на хроматографска система AKTA. Методът на инсталиране е подобен на хроматографската среда с опакован-слой; уверете се, че посоката на потока следва стрелката, отбелязана върху модула. Модулът може да бъде свързан с помощта на съединители Luer или съединители със скоби.

5.1.2 Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и използвайте буфер за еквилибриране, за да изчистите въздуха от модула. Продължете промиването, докато не се наблюдават мехурчета на изхода, след което свържете изхода за пермеат към хроматографската система.

5.2.:Под-подготовка преди употреба

5.2.1: Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и извършете предварителна обработка, като използвате 0,5 M NaOH за повече от 5 MV, за да гарантирате, че мембраната ще достигне равновесие.

5.2.2: При същите условия на дебит, извършете предварителна -обработка с 1 M NaCl за повече от 5 MV, за да гарантирате, че мембраната ще достигне равновесие.

5.3. Процес на хроматография

5.3.1 Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и извършете предварителна-обработка с еквилибриращ буфер за повече от 5 MV, докато мембраната достигне равновесие.

5.3.2 След 0,22 μm предварителна -филтрация, заредете пробата върху колоната и продължете, докато се приложи цялата проба или се достигне капацитетът на хроматографско зареждане.

5.3.3 Промийте с еквилибриращ буфер за повече от 10 MV, докато UV стойността намалее до базовата линия.

5.3.4 В съответствие с плана на процеса, приложете градиентно елуиране или линейна елуираща система и съберете фракциите в сегменти, както е необходимо.

5.4 CIP обработка след -използване – CIP (Clean-in-Place) за мембранна хроматографска система.

5.4.1 Задайте скоростта на входния поток на 5–10 MV/min и третирайте с 1 М NaOH за повече от 10 MV, докато UV стойността падне под базовата линия.

5.4.2 След 30 минути циркулиращо измиване, изплакнете с вода, докато pH стане между 7 и 8, след това преминете към 20% етанол и продължете почистването, докато проводимостта остане почти непроменена.

5.5 Мембранно хроматографско съхранение

След използване и завършване на CIP, мембранният модул може да бъде отстранен и съхранен чрез накисване в 20% етанол или съхраняван онлайн при стайна температура в разтвор, съдържащ 20% етанол. 20% разтвор на етанол трябва да се проверява и сменя редовно.

 

6, Информация за поръчка

Капсулен филтър със слаба катионобменна мембрана тип CM-

	Лабораторен мащаб	Малък мащаб	Пилотна скала	Мащаб на производство
Модел	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Мембранна област	0,2 мл	5 мл	400мл	5L

Популярни тагове: sp силна катионнообменна мембранна хроматография, Китай, доставчици, производители, фабрика, търговия на едро, насипно състояние, на склад, безплатна проба