Мембранна технология и изясняване на ваксината (Ⅱ)

В предишната статия имахме някои предварителни въведения във ваксините и стратегиите за изясняване на ваксините и ще продължим да ги изследваме в останалата част от тази статия. Следвайки горното, ние ще продължим да споделяме разяснения за ваксини и свързани приложения на мембранни тъкани.

 

2.2.2 Влияние на физичните и химичните свойства на вируса

След разглеждане на производствената система и методите за отстраняване на съответните замърсители в етапа на избистряне е важно да се вземат предвид характеристиките на вируса и да се съсредоточите върху максимизирането на добива на вируса.

 

2.2.2.1 Лесна адсорбция на вируса
Разработени са положително заредени материали и помощни филтри (като диатомит) за подобряване на ефектите на дълбоко филтриране. Въпреки че положителният заряд увеличава улавянето на нуклеинови киселини и HCP, известно е, че диатомитът свързва клетъчни остатъци и колоиди. Въпреки това, тези материали могат също да задържат вируса чрез механизма на адсорбция. Тъй като вирусът обикновено е отрицателно зареден в разтвор, може да възникнат електростатични взаимодействия с положително заредения филтър.
Вирусите могат също да се свързват чрез своите хидрофобни или неспецифични взаимодействия с определени филтърни материали (като диатомит или стъклени влакна). Вирусите с обвивка, поради своята липидна обвивка, са по-податливи на тази адсорбция. Ако вирусът се адсорбира във филтъра чрез електростатични взаимодействия и вирусните частици се отделят поради конкуренцията на соли, изплакването на филтъра с високопроводим буфер може частично да възстанови вируса. Това обаче може също да елуира замърсители като HCP или нуклеинови киселини. Поради това се предпочита използването на алтернативен филтърен материал, като по-инертния полипропилен.
Adenovirus is easily adsorbed, but different results have been confirmed. Using positively charged diatomite and deep filters. Borosilicate glass fiber filter material is also very well recovered. On the other hand, a patent proposed by Weggeman involving clarification of 20 – 40% adenovirus losses at PER, et al. Cell cultures were prepared with similarly positively charged deep filters containing diatomite. In this case, the nominal polypropylene filter showed a very high viral recovery rate (> 90%).
Добре известно е, че грипните вируси са склонни към загуба на адсорбция по време на избистряне. Следователно, използването на безплатен филтър, базиран на полипропилен, е подходящо за избистряне на колекцията от грип. Thompson et al съобщават за използването на номинален 1,2 μm полипропиленов филтър, последван от 0.45 μm PVDF мембрана за избистряне на клетъчно базиран грипен вирус, произведен от MDCK клетки. Бяха извършени общо девет теста за пречистване при скала от 20L, натоварване от 111 L/m2 за 1,2 μm полипропиленов филтър и 105 L/m2 за 0,45 μm PVDF филтър. Резултатите показват, че по-голямата част от работещите вируси се възстановяват добре (78-154%). Те също така съобщават до 58% отстраняване на hcDNA, но без значително отстраняване на HCP.

 

2.2.2.2 Изрязване на чувствителни вируси

Някои вируси (капсулирани или некапсулирани) проявяват ниска механична устойчивост и могат да бъдат унищожени чрез излагане на срязване по време на етапите на центрофугиране и мембранна филтрация. Силите на срязване, генерирани по време на стъпките на пречистване, включващи филтриране или хроматография, могат да причинят падане на вирусната обвивка, като по този начин повлияят на инфекциозността. В зависимост от размера, дебелината и геометрията на капсида, вирусният капсид може да бъде крехък или, обратно, устойчив на високо налягане. Някои вируси с обвивка, като грипните вируси, са еластични на механичен стрес и могат да издържат на голяма деформация. От друга страна, силата на срязване може да доведе до падане на обвивката на по-малко устойчиви вируси, като ретровируси, като по този начин повлияе на инфекциозността на вируса.

VLPs от извънклетъчната обвивка също са много уязвими. Високи скорости на срязване се генерират в центробежния процес, главно на входа и изхода (високи скорости на срязване се генерират на границата газ-течност). Когато вирусът беше пречистен чрез градиентно центрофугиране, способността за трансдукция на някои ретровируси беше значително отслабена. При проектиране на центробежно разделяне трябва да се има предвид относителната нестабилност на вирусните частици спрямо силите на срязване. Центробежната сила не е единственият източник на удар на срязване, по-важен е дизайнът на оборудването, особено при внос и износ също има значителен удар на срязване. Разликите в дизайна на различните мащаби могат да доведат до разлики в добива и възстановяването на чувствителни на срязване вируси в различни мащаби.

Чувствителните на срязване вируси трябва да бъдат внимателно проектирани, тъй като величината на напрежението на срязване и времето на излагане на напрежението (поради рециркулация) могат да бъдат високи. За чувствителни на срязване вируси се предпочитат устройства с отворена верига (устройства с кухи влакна или отворени пластини) за намаляване на турбулентността и силите на срязване в захранващия канал.

Изборът на работни параметри също трябва да минимизира увреждането на вирусните частици: нисък напречен поток, средно трансмембранно налягане (TMP) и кратко време за обработка.

Замърсяването на мембраната под високо налягане води до загуба на вирусна инфекциозност, вероятно поради силите, които действието на срязване може да действа върху вирусната обвивка. Мембранното разделяне се основава на размера и натрупването на вирусни инхибитори с голямо молекулно тегло и вирусни частици може да намали инфекциозността на вирусните вектори.

Разграждането на чувствителни на срязване вируси по време на дълбока филтрация не е широко документирано. Загубата на вируси при дълбока филтрация най-често се дължи на улавяне, адсорбция или зависимо от времето и температурата вирусно разграждане на продукта. Всъщност, въпреки че може да възникне механично напрежение в NFF системите, времето на излагане на NFF продуктите на срязване е много кратко в сравнение с други технологии поради бързото еднократно преминаване, което се наблюдава при NFF продуктите.

 

2.2.2.3 Прехващане според размера на отвора

Вируси над 100 nm могат да бъдат задържани чрез премахване на микоплазмени или стерилни мембрани (0.22 μm и по-малко). В този случай трябва да се обърне специално внимание на избора на филтри. За стъпките на микрофилтрация TFF се предпочитат мембрани 0.45 μm или 0,65 μm за добри канали за продукти. За NFF многостепенна филтрация най-плътният слой е по-голям или равен на 0,45 μm. Трябва да се внимава при избора на дълбок филтър, тъй като някои устройства с дълбок филтър може да съдържат слой филм, което може да доведе до загуба на продукт от задвижването за задържане. Агрегацията на вируси влияе отрицателно върху производството на вируси и подобрява задържането на вируса поради размера на вируса.

Според патент на Andre и Champluvier хомогенизирането може да предотврати или ограничи запушването на филтъра чрез намаляване на размера на агрегата, осигурявайки по-висок добив. Хомогенизирането също подобри капацитета за филтриране на реколтата, който се увеличи с 2.{1}} пъти.

Твърде много примеси могат да попречат на възстановяването на вируса. Примесите са склонни да запушват филтъра, а запушените пори на мембраната могат да доведат до намалени скорости на преминаване на вируса. В патент на de Vocht и Veenstra се споменава, че директното избистряне на висока клетъчна плътност Per. Събирането с TFF ({{0}}.65 или 0.2 μm мембрана) доведе до възстановяване на вирус без аденовирус. Възстановяването може да бъде постигнато чрез селективно отстраняване на утаяване на ДНК на клетка гостоприемник преди етапа на 0,65 μm TFF. 70% от аденовирусите.

 

 

2.3 Казус от практиката: Оптимизиране на изясняването на вирусна ваксина

На Международната конференция за биологични процеси през 2011 г. Sanofi Pasteur представи рационален подход към скрининговите филтри за разработването на нови изяснени последователности за кандидат вирусни ваксини. Изследването има за цел да преодолее проблемите, срещани при оптимизирането на процесите на култивиране на клетки и вируси. Модификациите на процеса нагоре по веригата доведоха до 20% загуба на добив и преждевременно замърсяване на филтъра по време на етапа на избистряне, което доведе до липса на мащабиране. За да се установи стабилна и мащабируема стъпка на избистряне, беше необходима пълна повторна разработка на филтърната последователност, с нива на възстановяване на вируса, по-високи от 85%.

Based on internal experience and scientific publications, the team selected 27 filters for an initial screening study. Small scale virus adsorption tests were performed on various filter media (polypropylene, nylon, cellulose ester, glass fiber, charged adsorption filter) and structures (pleated or deep filter). The virus yield was measured by ELISA and the clarifying efficiency of the preselected filtrate was compared by checking the reduction of turbidity. Preliminary screening studies showed that nylon and charged filters retained viral particles and virus recovery. Ten percent. The virus recovery rate of polypropylene and polyether sulfone filter was >. 80%. Степента на възстановяване на филтрите от целулозен естер и стъклени влакна зависи от оценката на филтъра (20% или 90%).

Като втора стъпка Sanofi Pasteur оцени няколко комбинации (фаза 2 или фаза 3 последователности) от седемте филтъра, предварително избрани в скрининговото проучване. Тестът за класифициране на постоянен поток беше извършен с малък филтър. В допълнение, този експеримент използва по-висок добив от скрининговото изследване. Въз основа на резултатите от възстановяването на вируса и капацитета на филтъра, екипът избра двете най-добри комбинации за по-нататъшно проучване.

- Последователност 1 (Етап 2): 30 μm номинален номинален нагънат полипропиленов предфилтър, последван от композитен целулозен естер и многослоен филтър от стъклени влакна (1/0,5 μm порьозност)

- Последователност 2 (етап 3): същият предфилтър (30 μm номинален номинален полипропиленов филтър), последван от междинен многослоен полипропиленов филтър и накрая асиметричен полиетерсулфонов филм.

 

The robustness of these two clarified sequences has been challenged by repeated constant flow sizing experiments with different harvest batches. While both potential sequences demonstrated enhanced capabilities compared to the reference sequence, only sequence 1 achieved virus recovery objectives (>85%), както е показано на фигура 1.

Фигура 1 Средно възстановяване на вируса при всяка стъпка на филтриране. Проучванията за стабилност бяха оценени за три филтрационни последователности, от които само последователност 1, използваща 30 μm номинално номинален сгънат полипропилен и 1.0/0,5 μm целулозен естер и филтър от стъклени влакна, постигна глобалната цел за възстановяване .

Центрофугирането също беше оценено като първичен етап на избистряне, последвано от окончателно филтруване на {{0}}.45 μm. Тествани са няколко двойки скорост/продължителност. Въпреки че скоростта на филтриране от 0,45 μm беше увеличена два пъти, крайният добив беше по-нисък от целта от 85%. В резултат на това центрофугирането не е проучвано допълнително.

И накрая, ефективността на филтриращите последователности от полипропилен и стъклени влакна беше оценена в по-голям мащаб (размер на биореактора 160 L). Последователността на филтъра е показана на фигура 2.

Фигура 2 изяснява филтърната комбинация и графично представяне на стъпковия добив на низа. Влак А е традиционният процес, а влак Б е оптимизираният процес. Оптимизираната последователност B може да намали зоната на предварителна филтрация с 3 пъти, да отмени стъпката на междинно филтриране и да намали крайната площ на филтриране с 10 пъти, като по този начин увеличи глобалното възстановяване на вируса с 3%.

Няколко партиди бяха успешно избистрени без признаци на запушване на филтъра, времето за обработка в съответствие с производствените лимити и добив на вирус > осемдесет и пет процента. Оптимизирането на етапа на избистряне няма ефект върху стъпките надолу по веригата и ключовите качествени атрибути на ваксината. Следователно избраната последователност на избистряне беше използвана в процеса на производство на ваксина (биореактор с размер 1000 L) и ефективността беше успешно потвърдена.

 

03 Изясняване на бактериалните ваксини

3.1 Съображения за изясняване на бактериалните ваксини

Според Медицинския тезаурус (2015 г.) бактериалната ваксина се дефинира като суспензия от разредени или убити бактерии или техни антигенни производни, която се използва за предизвикване на имунен отговор за предотвратяване или лечение на бактериални заболявания. По-общо, бактериалните ваксини могат да бъдат разделени на четири подкатегории въз основа на вида на активния антиген. Този агент може да бъде:

- Убива или отслабва всички живи бактерии. Известна също като BCG ваксина.

- Пречистване на антигенни детерминанти (субединични ваксини). Ваксина срещу антракс или ацелуларна ваксина срещу коклюш.

- Бактериални токсини (токсоиди). Дифтериен и тетаничен токсоид.

- Плазмид (pDNA).

Поради широката хетерогенност на продуктите на семейството, предизвикателствата на процеса нагоре и надолу по веригата до голяма степен зависят от вида на произвежданата ваксина. Следователно, след като първоначалният етап на ферментация може да бъде пречистен или не, така че да може да се извърши етапът на избистряне.

 

3.2 Стратегия за изясняване на бактериалната ваксина

3.2.1 Токсоид

Двата най-често срещани токсоида, произвеждани за използване във ваксина, са дифтериен и тетаничен, които се произвеждат съответно от Corynebacterium diphtheriae и Clostridium tetani. Производството на двете ваксини е предмет на строги регулаторни изисквания. Техническият доклад на СЗО и неговите приложения правят ясни препоръки за гарантиране на качеството, безопасността и ефективността на ваксините срещу тетанус и дифтерия. Общите добри производствени практики се прилагат за производството на двете ваксини и служителите трябва да бъдат надлежно обучени и да получат бустер имунизация срещу двете болести.

GMP стриктно изисква чистотата и качеството на крайния продукт да бъдат демонстрирани. Според СЗО и ЕП, ефикасността на окончателната ваксина срещу тетанус трябва да се определи чрез сравнение in vivo или с друг доказан метод с подходящо референтно вещество, калибрирано в международни единици съгласно Международния стандарт за тетаничен токсоид. Актуализираните изисквания за ефикасност бяха публикувани през 2011 г. и могат да варират в зависимост от метода на оценка. Безопасността (без токсини и възстановителна токсичност) на всяка партида ваксина също трябва да бъде доказана. И накрая, трябва да се обърне внимание на стабилността на ваксините, особено в реално време.

 

3.2.2 Плазмидна ДНК ваксина

Плазмидни ДНК ваксини се използват за целите на здравето на животните, а няколко плазмидни ДНК ваксини за човешка употреба са в различни етапи на разработка и клинична оценка. След ферментация на E. coli, бактериите се събират и разцепват, за да се освободи плазмидна ДНК.

Отстраняването на клетъчните остатъци обикновено се извършва чрез центрофугиране или филтруване. Темата е обстойно засегната в последните публикации. В тази публикация текущи процеси и предизвикателства на pDNA нагоре, надолу по веригата и формулиране.

Авторите също така дават представа за пропуските на всяка стъпка от типичния процес на производство на pDNA и потенциални бъдещи иновации и/или настоящи пропуски в технологиите, които биха могли да доведат до по-нататъшно оптимизиране на процеса.

Плазмидните ДНК ваксини се приготвят на два етапа. Първо, бактериалните клетки се отстраняват от културалната среда и второ, клетъчните остатъци след клетъчния лизис се отстраняват. В зависимост от мащаба, клетките се събират чрез центрофугиране или TFF микрофилтруване. Дисковата центрофуга се изхвърля периодично с висока скорост и добивът на свръхнавити плазмиди е слаб поради повреда от срязване по време на изхвърляне. Ако трябва да се използва центрофугиране, най-добре е центрофуга с твърда купа. Устройства с отворен канал, плоски TFF с 0.1 или 0.2 μm микрофилтрационни мембрани или устройства с кухи влакна могат да работят добре.

Тъй като устройствата с кухи влакна имат висок солиден капацитет на натоварване, понякога им се дава приоритет. Обикновено тези процеси протичат при 3-5 пъти концентрацията, последвана от 3-5 обема трансфилтрация. За да се намали срязването и да се контролира по-добре поляризацията на мембраната, силно се препоръчват операции за контрол на проникването. Въпреки че центрофугите са по-рентабилни при широкомащабни търговски операции, по-малките процеси са склонни да използват филтриране поради преносимостта и лекотата на работа.

Флокуланти са използвани за улесняване на обработката, но това може да доведе до загуба на продукт. Някои също така препоръчват използването на инертни частици от диатомит, последвано от филтриране в торба.

Cell lysis produces viscous products, including large particles, cell fragments, soluble impurities, fine colloidal particles, and pDNA. Due to the complexity of the material, removing such fine solids is a difficult separation. Gradient density deep filter or open hole structure (>0.45m) мембранните филтри са добри за премахване на клетъчни остатъци. Поради силното запушване на клетъчни остатъци се предпочита филтриране с нисък поток или ниско налягане. Микрофилтри, базирани на Tff, са използвани за тази стъпка и ръкавни филтри в индустриален мащаб. Статичното (в смесителен съд) и непрекъснатото (с използване на вграден статичен миксер) крекинг изисква различни филтри.

 

3.3 Казус от практиката: Сравнение на ефикасността на методите на центрофугиране, NFF и TFF за избистряне на тетанични токсини

Muniandi и др. сравнява три различни метода за избистряне на тетанични токсини и токсоиди от ферментационни течности, а именно центрофугиране, дълбока филтрация (NFF) и TFF. Тестовият материал беше произведен в 400L ферментатор, използвайки модифицирана среда на Miller (MMM). При изследването с центрофугиране клетките се отделят от сърцето при 4000 RPM в контейнер 6 × 1L за 60 минути. Бяха взети проби от супернатанта за откриване на възстановяването на токсоид. Дълбокото филтриране използва 0,45 μm и 0,22 μm дълбоки филтри, съдържащи диатомит и целулоза за избистряне на ферментационния бульон. Процесът се извършва при температура от 35 градуса и 12psi.

TFF модул с отворен плосък панел е термично свързан към 0.22μm PVDF мембрана при TFF метода. Процесът на избистряне, базиран на TFF, се извършва при скорост на напречен поток от 2000 L/h при 23 градуса, а избистреният филтрат се концентрира при скорост на напречен поток от 1000 L/h при 25 градуса, като се използва конвенционална TFF сандвич 30kD PES мембрана. Избистрената месна течност (около 6 L) се концентрира 10 пъти в този процес на ултрафилтрация. Бяха проведени тестове за тетаничен токсоид върху концентрирани фиксиращи проби за оценка на възстановяването на продукта.

Дълбокото филтриране доведе до степен на възстановяване на продукта от приблизително 89%, като TFF единиците водят до степен на възстановяване на продукта от над 97%. Процесите на микрофилтрация и ултрафилтрация постоянно водят до по-високо възстановяване на продукта от NFF процеса. Тези резултати се основават на тестове за флокулация (Lf).

 

04Изясняване на полизахаридните ваксини

4.1 Обмисляне на изясняването на полизахаридната ваксина

Процесът на производство както на несвързани/свободни полизахаридни ваксини, така и на свързани полизахаридни ваксини започва с култивиране на бактерията гостоприемник във ферментатор. В края на ферментацията бактериите могат да бъдат третирани с почистващи агенти като DOC (натриев деоксихолат), Triton®X-100 или други подходящи реагенти за унищожаване на бактериите и насърчаване на освобождаването на полизахариди. Поради големия капацитет на батерията, събирането директно чрез NFF не е икономически осъществимо, тъй като пропускателната способност може да бъде много ниска. Следователно идеалният избор е да се използва центрофуга за разделяне на клетъчните бучки. Обхватът на микрофилтрация TFF също може да се използва. Безклетъчният център/пенетрантът, съдържащ полизахарида, който представлява интерес, се избистря допълнително чрез система за дълбоко филтриране на NFF, последвана от филтриране с биологична смес и след това се преминава към обработка надолу по веригата за по-нататъшно пречистване.

 

4.2 Стратегия за изясняване на полизахаридната ваксина

4.2.1 Първа процедура за изясняване

Центрофугирането е една от най-разпространените техники за отделяне на клетки от ферментационни течности. В зависимост от мащаба може да се избере непрекъснато центрофугиране или периодично центрофугиране. Важно е да се отбележи, че правилното оптимизиране на условията на центрофугиране и тяхната работа е от съществено значение за успешното пречистване надолу по веригата. Когато избирате конкретна TFF мембрана и размер на порите, е важно да имате предвид молекулното тегло на полизахаридите, които често са големи и структурно сложни, с молекулни тегла, вариращи от приблизително 500kDa до повече от 1000kDa. Поради големия размер на отворените пори, използването на 0,22 μm, 0,45 μm, 0,65 μm MF мембрани може да осигури успешно възстановяване на PS молекули в осмотичния разтвор.

 

4.2.2 Процедура за вторично изясняване

Бистротата/мътността на безклетъчния ферментационен разтвор, който достига вторичния етап на избистряне, зависи от специфичните бактерии, типа на разцепване, индивидуалния тип серум и техниката, използвана за първичния етап на избистряне. Мътността на центъра може да варира от около 50 до 150 NTU. Положително зареден дълбок филтър с фракционна плътност, направен от импрегниран диатомит с напълнени целулозни влакна, може да се използва за избистряне и намаляване на неговата мътност до < 5NTU.

Обемната пропускателна способност на този дълбок филтър може да варира от приблизително 150 L/m3 до 250 L/m3. Обикновено разтворът на избистрения продукт се филтрира през следваща 0,45 μm биоподдържана редукционна мембрана или 0,22 μm стерилизирана мембрана за отстраняване на всички останали клетъчни частици, колоиди и потенциални микроорганизми.

 

4.3 Казус от практиката: Изясняване на центъра на ферментационния бульон на Streptococcus pneumoniae след центрофугиране

Клетките бяха разделени чрез добавяне на {{0}}.1% (v/v) тип 8 Streptococcus pneumoniae ферментационен бульон (20 L) чрез непрекъснато центрофугиране. Центърът на колекцията се филтрира през два отделни дълбоки филтъра с положителен заряд и диатомит, съдържащи целулозни влакна. Индивидуалният дълбок филтърен филтрат след това се филтрира през биозаредена PVDF 0,45 μm мембрана с редукционен клас. Всички филтрационни тестове бяха извършени в режим на постоянен поток с перисталтични помпи. Филтрационните тестове с използване на зареден дълбок филтър и ферментационен бульон от Streptococcus pneumoniae серотип 8 доведоха до спад на мътността от приблизително 120 NTU до 3 NTU. Тестовете бяха проведени при дебит от 140,150 L/m2/час и разлика в налягането в крайна точка от 20-25 psi, с обемна производителност от приблизително 180-200 L/m2.

Подобни филтрационни тестове бяха извършени върху ферментационния бульон на Streptococcus pneumoniae серотип 19А. Центрофугираната 19A течност се избистря чрез зареден дълбок филтър, който намалява мътността от около 40 NTU до 3 NTU. Тестовете бяха извършени при постоянен дебит от около 140-160 L/ m2 / час и обемна производителност от 200-230 L/ m2 беше постигната при налягане в крайна точка от около 15 psid. HLPC анализ на проби от продукти, събрани по време на тестове за оценка на филтрацията, не показа значителна загуба на добив за дълбока филтрация или 0.45 μm (или 0,22 μm) мембрани.

 

05 Заключение

Развитието на процесите на избистряне изисква интегрирането на няколко единични процеса като центрофугиране, TFF-MF, дълбоко филтриране и асептично филтриране. Оптимизирането на процеса на изясняване изисква разбиране за това как различните операции на единица влияят една на друга. Предизвикателството е да се изберат технологии и инструменти (оборудване и приспособления), които да отговорят на все по-сложните изисквания на технологичните течности, произведени от днешните по-ефективни биореактори. Увеличаването на производителността нагоре по веригата (вирусен титър, клетъчна плътност и т.н.), клетъчни остатъци и продукти на клетъчен лизис увеличава трудността на процеса на избистряне и обърква избора на оборудване за разделяне и филтриране.

Дизайнът на оборудването, лекотата на използване и чистотата трябва да се имат предвид при избора на мащаб на процеса. Това ще осигури ефективно преобразуване и безопасност на оператора при работа с изхвърлени филтри. За да се развие процесът на избистряне, силното интегриране на стъпките на избистряне е важно, за да се гарантира, че обработката на реколтата нагоре по веригата е рентабилна. Гама от филтриращи единици са лесно достъпни за улесняване на лабораторните тестове, пилотното производство и обработката в пълен размер. Чрез внедряване на добре проектиран работен план за мащабиране, който оценява множество опции за избистряне, човек може уверено да избира и оразмерява филтри за избистряне, за да защити операциите на единиците надолу по веригата, като същевременно намали оперативните разходи.

Изясняването на ваксината представлява няколко предизвикателства. Обикновено процесът на филтриране трябва да бъде съобразен с производствената система, агента за инактивиране или лизис и представянето на антиген, а не непременно ваксини. Традиционните процеси на ваксина обикновено използват центрофугиране за първоначално избистряне на ваксината. Съвременните ваксини с множество технологични платформи и по-малки обеми на обработка правят ваксините по-подходящи за избистряне чрез мембранно базирани технологии. Новоразработените ваксини, използващи модерни клетъчни линии и експресионни системи и използвайки по-дефинирани условия на клетъчна култура, правят много процеси на ваксина по-благоприятни за филтриране.

 

Въпреки това, хетерогенността в антигенния компонент или "прицелния антиген" на продуктите от ваксината увеличава сложността на филтрационното избистряне. Антигените се различават по размер, повърхностна химия и заряд. Тези характеристики влияят на добива и възстановяването на антигени. Ваксините представляват уникални предизвикателства за изясняване, главно поради размера на техните макромолекули. Това, съчетано с проблемите с възможностите около изясняването, увеличава необходимостта от насоки относно стратегиите за развитие на процеси.

Размерът и мащабът на операция в търговски мащаб за производство на ваксини оказва значително влияние върху избора на технология за избистряне. Тъй като се намира нагоре по веригата на процеса, правилното оптимизиране на избистрянето е от решаващо значение за успеха на операциите надолу по веригата, максимизирайки добива, възстановяването и устойчивостта на процеса. Докато центрофугирането остава жизнеспособна техническа опция за първично избистряне, модулите за микрофилтрация с отворен канал (TFF) за първично избистряне и фините дълбоки филтри или мембранните филтри за вторично избистряне набират признание в индустрията за ваксини. Тази промяна се дължи на необходимостта от по-бърза обработка, бързо развитие на процеси, преносими процеси и внедрявания за еднократна употреба. NFF предлага икономичен процес, подходящ за малки до големи опции за еднократна употреба. Поради променящите се регулаторни нужди, наличието на предварително асептични устройства или модули за гама облъчване, предназначени за автоклавиране, насърчава по-бързото адаптиране на базирани на NFF или TFF технологии.

Много класически процеси на ваксини включват еволюцията на операциите на отделението за избистряне, до голяма степен поради регулаторни ограничения и свързаните с тях високи разходи за повторно валидиране и повторно подаване или клинични изпитвания. Платформеният процес, използващ схемата за избистряне, базирана на филтриране, е широко използван в няколко биологични агента с висока степен на успех. Примерите и случаите, описани в този документ, показват, че производителите на ваксини имат потенциала да постигнат това ниво на стабилност, икономическа жизнеспособност и полезност за еднократна употреба, като следват шаблонния подход.

Други предимства на филтрирането пред центрофугирането са чувствителните на срязване вируси или вирусите, които са склонни да се натрупват на въздушния интерфейс. Тъй като производителите на устройства пускат нови продукти на пазара, производителите на ваксини ще продължат да бъдат по-добре оборудвани за процеса на изясняване.

 

Като първата компания във веригата за локализация, Guidling Technology натрупа достатъчно подходящ опит в изясняването на ваксини. Guidling Technology е компания за разработка и производство, фокусирана върху биофармацевтични и клетъчни култури, пречистване и разделяне. Продуктите се използват широко в биомедицината, диагностиката, промишлената филтрация на течности, откриването, избистрянето, пречистването и процеса на концентрация; Guidling успешно разработи епруветка за центрофуга за ултрафилтрация, мембранна касета за ултрафилтрация/микрофилтрация, филтър за отстраняване на вируси, филтърно устройство за тангенциален поток, стек с дълбока мембрана и т.н., които напълно отговарят на сценариите за приложение на биофармацевтични и клетъчни култури.

Нашите мембрани и мембранни филтри се използват широко при концентрация, екстракция и разделяне на предварителна филтрация, микрофилтрация, ултрафилтрация и нанофилтрация. Нашата широка гама от продуктови линии, от малки лабораторни филтри за еднократна употреба до системи за филтриране от производствен тип, тестове за стерилност, ферментация, клетъчни култури и други, могат да отговорят на нуждите от тестване и производство.