Ефикасен и евтин процес за избистряне и ултрафилтрация на дрожди, експресиращи рекомбинантни протеини

Експресията на дрожди на екзогенни гени може не само да произвежда рекомбинантни протеини и пептиди, антитела и ваксини, цитокини, растежни фактори, хормони и други биоактивни вещества, но също така може да се използва за производство на индустриални ензими, функционални храни и биологични материали, което има широки перспективи за приложение .

 

Системата за експресия на дрожди включва две често използвани системи за експресия, тоест система за експресия на Saccharomyces cerevisiae и система за експресия на метанотрофни дрожди. Системата за експресия на дрожди с метанол е най-широко използваната система за експресия на дрожди в момента, а Pichia е най-често използваната, която може да използва метанол като въглерод и енергия. Освен това има дрожди на Хансен, Sphaeroides и така нататък.

 

Без значение какъв вид система за експресия на дрожди, нейните процеси на разделяне и пречистване надолу по веригата са сходни и специфичният поток на процеса взема експресията на дрожди на рекомбинантни протеини и полипептидни лекарства като пример.

 

Мембранните касети за микрофилтрация Guidling приемат канал с отворен поток и режим на филтриране на тангенциален поток, които могат ефективно да обработват сложна захранваща течност, като течност за ферментация на дрожди и течност за крекинг на E. coli при висока скорост и могат да осигурят линейно усилване от малък тест до производствен мащаб. Компактният модулен дизайн, опростеното тръбопроводно свързване, независимостта и четливостта на системата могат да защитят операторите и да предотвратят биологично замърсяване. И без проверка за поддръжка и почистване. Следователно, той е много подходящ за стъпката на избистряне на ранната обработка надолу по веригата.

 

Основната цел на UF/DF процеса е да премахне примесите и да измести буферите. Мембранната касета за ултрафилтрация Guidling има добра хомогенност на размера на порите на мембраната и силна хидрофилност, което може да даде на мембраната по-висок поток и по-ниска адсорбция на протеини и оптимизиран дизайн на канала за потока, с по-малък спад на налягането, лесен трансфер на материала и значително съкращаване на времето за филтриране. Освен това продуктовата серия е пълна и гъвкава, за да отговори на нуждите на различни приложения от различен мащаб. Следователно, той е много подходящ за UF/DF етап на обработка надолу по веригата.

 

Следващото е случаят на приложение на мембраната Guidlingкасетав дрождената експресия на рекомбинантни протеини.

 

Микрофилтрационно избистряне

Използвахме {{0}}.11 квадратни метра 0,22 μm мембранна касета с пори, за да избистрим 1,5 L течност за ферментация на дрожди (молекулно тегло на целевия протеин 42-55 KD) чрез микрофилтрация. В целия процес на микрофилтрация бяха изследвани скоростта на възстановяване на целевия протеин, промяната на мътността и изчерпването на мембранния поток.

0-17min е процесът на концентрация, 17-32min е процесът на измиване и филтриране. По време на целия процес на микрофилтрация TMP постепенно се увеличава, скоростта на входа на течността остава непроменена и средният поток на материала е 45LMH.

Мътността на течността беше 600NTU преди микрофилтруване и 8NTU след микрофилтруване и мътността се промени очевидно.

Резултатите показват, че добивът на целевия протеин е > 90%. Мембранната касета Guidling Technology 0,22μm е стабилна и подходяща за този сценарий на приложение.

 

Ултрафилтрационна концентрация

 

 

Резултатите показват, че целевият протеин е напълно уловен. Мембранните касети Guidling Technology 10kd могат да работят стабилно и са подходящи за този сценарий на приложение.

Повечето от рекомбинантните протеини, експресирани от дрожди, не са силно експресирани. Мътността на филтрираната течност беше очевидно намалена и степента на възстановяване на протеина беше по-висока. Тъй като последващото хроматографско време е твърде дълго, то ще причини неблагоприятни ефекти върху протеина, за да се съкрати времето за хроматографско вземане на проби, може да се добави една стъпка на ултрафилтрационна концентрация и целевият протеин може да се концентрира бързо след пробата, което може постигане на целта за спестяване на време, намаляване на обема на пълнителя и по този начин намаляване на производствените разходи.

 

Микрофилтрационните мембранни касети на Guidling Technology обикновено могат да намалят мътността на захранващата течност до по-малко от 20NTU, като напълно отговарят на нуждите от последваща ултрафилтрация и хроматография. Степента на възстановяване при ултрафилтрация на касетите с ултрафилтрационна мембрана ще варира в зависимост от различните материали, общата степен на възстановяване може да достигне 90-95%.

Guidling Technology ви приветства да поискате тестови комплекти за свързана оценка.

 

Относно Guidling

Guidling Technology е национално високотехнологично предприятие, фокусирано върху биофармацевтични продукти, клетъчни култури, пречистване и концентрация на биомедицина, диагностика и индустриални течности. Ние успешно разработихме центробежни филтърни устройства, ултрафилтрационни и микрофилтрационни касети, вирусен филтър, TFF система, дълбочинен филтър, кухи влакна и т.н. Които напълно отговарят на сценариите за приложение на биофармацевтични продукти, клетъчни култури и т.н. Нашите мембрани и мембранни филтри се използват широко при концентрация, екстракция и разделяне на предварителна филтрация, микрофилтрация, ултрафилтрация и нанофилтрация. Нашите многобройни продуктови линии, от малка лабораторна филтрация за еднократна употреба до производствени филтриращи системи, тестове за стерилност, ферментация, клетъчни култури и други, отговарят на нуждите от тестване и производство. Guidling Technology очаква с нетърпение да си сътрудничи с вас!